酶標(biāo)分析儀的免疫吸附試驗(yàn)原理步驟
作者：admin 時(shí)間：2021-06-15 01:05:15 點(diǎn)擊次數(shù):1385
酶標(biāo)儀是一種應(yīng)用非常廣泛的醫(yī)療設(shè)備。酶標(biāo)分析儀免疫吸附試驗(yàn)的基本原理如下:
1、先將多余的特異性抗體(或抗原)涂在載體(酶標(biāo)板)上，通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)使副物質(zhì)(抗原或抗體)和酶標(biāo)(用hrp -辣根過(guò)氧化物)。酶標(biāo)抗體或抗原)也與載體結(jié)合(固相分離)。洗去游離酶標(biāo)簽后，添加底物。與載體結(jié)合的標(biāo)記酶促進(jìn)了底物的顏色。*后，利用光電比色法對(duì)測(cè)試對(duì)象進(jìn)行定性判斷或定量測(cè)定。上述方法的靈敏度可達(dá)ng/ml水平。
2、包覆ELISA板:在ELISA板孔中加入特異性抗原溶液，4℃過(guò)夜。然后洗3到5次,清洗解決方案(檔板洗板),這樣的特異抗原的解決方案是牢牢地吸附在表面的microwell微量滴定板,形成固相抗原和殘余液體雜質(zhì)沖走。
3、加入被包被抗原溶液(患者血清):如果被包被抗原溶液中含有被測(cè)抗體，經(jīng)孵育反應(yīng)后，會(huì)與被包被抗原特異性結(jié)合，形成被包被抗原與被測(cè)抗體的復(fù)合物。它被吸附在微量滴定板的微孔表面。然后再次清洗，以清除殘留的液體和干擾物質(zhì)。
4、添加酶偶聯(lián)物:孵育反應(yīng)后，形成包被抗原+試驗(yàn)抗體+酶標(biāo)記抗原的三組分復(fù)合物，也吸附在微孔表面，再進(jìn)行洗滌，去除游離或非特異性酶偶聯(lián)物(洗盤)污漬。
5、加顯色液:顯色反應(yīng)10分鐘至20分鐘后，被吸附絡(luò)合物中的酶與顯色底物溶液形成顯色液。此時(shí)，由于游離或非特異性吸附的酶已被去除，溶液的顏色僅取決于已與被分析物結(jié)合的酶的數(shù)量，所以它能真實(shí)反映被分析物的濃度。酶凝固的越多，顏色就越深，這意味著被分析物的濃度就越大。
6、加停止液:停止顯色反應(yīng)。
酶標(biāo)儀檢測(cè):將顯色的酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀上進(jìn)行光電比色檢測(cè)。該儀器檢測(cè)空白孔、陰性和陽(yáng)性對(duì)照孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、質(zhì)控孔和患者樣品孔的吸光度。值，并根據(jù)程序要求自動(dòng)計(jì)算患者樣本中分析物的濃度或進(jìn)行定性分析。
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